Ojiji na akpachapụ anya nke tube centrifuge ultrafiltration
1) Họrọ tube ultrafiltration kwesịrị ekwesị.Rịba ama na akpụkpọ anụ UF dị iche na ọkwa ha nke nnabata kemịkalụ dị iche iche.Dịka, enwere ike ịhọrọ tubes ultrafiltration nwere mbelata ịdị arọ molekụla 10 kDa na mbelata ịdị arọ molekụla nke na-ekwesịghị ịdị karịa 1/3 nke ịdị arọ molekụla nke protein mmasị, dị ka 35 kDa.Ọ bụrụ na ịdị arọ molekụla nke protein nke mmasị dị gburugburu 10 kd, enwere ike iji tube ultrafiltration nwere mbelata arọ molekụla nke 3 KD.
(2) ultrafiltration, nke azụtara ọhụrụ, akpọnwụwo, na-agbakwunye mmiri ultrapure tupu ejiri ya na mmiri gafere kpamkpam na akpụkpọ ahụ, ịsa ahụ ice ma ọ bụ friji dị njikere maka nkeji ole na ole.A na-awụpụ mmiri ahụ, ya bụ mmiri mmiri protein, na ole agbakwunyere, nke ọ bụla na-abụghị karịa ahịrị ọcha dị n'elu tube.Ọrụ ahụ dị ọkụ, na tube ultrafiltration kwesịrị ka ajụkwa oyi na ice tupu ị gbakwunye ngwọta protein.
3) Ma uka na etiti ike ndọda ga-eru nguzozi.Rịba ama na ntụgharị ntụgharị na osooso adịghị ngwa ngwa, ma ọ bụghị ya na-emebi akpụkpọ ahụ ultrafiltration ozugbo.A malitere sentrifugal ultrafiltration (centrifuge precooled ruo 4 degrees).Mgbe RPM nke centrifuges dị iche iche gbanwere ka ọ bụrụ g, ọ dị iche.A na-emezi ngwangwa nke centrifuge ka ọ dị ntakịrị, na-ebelata nrụgide na akpụkpọ ahụ.Rịba ama, jide n'aka na ị ga-ahapụ centrifuge mgbe centrifuge rutere n'ọsọ ebe ọ na-aga, ma ọ bụ ọ bụrụ na ị nwere nsogbu, ị nweghị ike ijikwa ya na nke mbụ.A na-edozi nghazi nke akpụkpọ ahụ na spindle dị ka ntuziaka ahụ si dị (ikpe centrifuge angular bụ akpụkpọ ahụ ruo axis perpendicular).N'iji ya eme ihe, ọsọ ọsọ n'ozuzu ya dị ala karịa na ntụziaka ahụ, nke mere na ndụ nke tube centrifuge nwere ike ịgbatị.
3) Ma uka na etiti ike ndọda ga-eru nguzozi.Rịba ama na ntụgharị ntụgharị na osooso adịghị ngwa ngwa, ma ọ bụghị ya na-emebi akpụkpọ ahụ ultrafiltration ozugbo.A malitere centrifugal ultrafiltration (centrifuge precooled ruo ogo 4).Mgbe RPM nke centrifuges dị iche iche gbanwere ka ọ bụrụ g, ọ dị iche.A na-emezi ngwangwa nke centrifuge ka ọ dị ntakịrị, na-ebelata nrụgide na akpụkpọ ahụ.Rịba ama, jide n'aka na ị ga-ahapụ centrifuge mgbe centrifuge rutere n'ọsọ ebe ọ na-aga, ma ọ bụ ọ bụrụ na ị nwere nsogbu, ị nweghị ike ijikwa ya na nke mbụ.A na-edozi nghazi nke akpụkpọ ahụ na spindle dị ka ntuziaka ahụ si dị (ikpe centrifuge angular bụ akpụkpọ ahụ ruo axis perpendicular).N'iji ya eme ihe, ọsọ ọsọ n'ozuzu ya dị ala karịa na ntụziaka ahụ, nke mere na ndụ nke tube centrifuge nwere ike ịgbatị.
(4) Mgbe etinye uche na 1ml fọdụrụnụ, were 50ul nke ngwọta nchekwa, gbakwunye 10ul nke na-asọba wee hụ ma ọ dị na agba anụnụ anụnụ, dị ka ikpe ma tube ultrafiltration na-efu protein.Ọ bụrụ na tube ahụ na-agbapụta, wụsa oyi akwa dị elu wee banye n'ime tube ọhụrụ ka ịmalite ultrafiltration.Iji chọpụta kpọmkwem ma ọ bụrụ na-atụfu tubes, centrifuge maka 10min na 5mgml nke BSA tupu eruba, na-agba ọsọ na protein gluu, ma ọ bụ Bradford crude assay, ma gaa n'ihu na-agbakwụnye ihe ngwọta protein fọdụrụnụ (nke na-arụ ọrụ na ice ma na-egbochi protein site na kpo oku) ruo mgbe. agbakwunyere itinye uche niile.Kpachara anya n'oge centrifugation ma ọ bụrụ na mmiri ozuzo nke protein na-eme, na-eduga na mmechi tube.Ọ bụrụ na mmiri ozuzo emee, chọpụta ma kpọmkwem ihe kpatara mmiri ozuzo bụ oke protein protein ma ọ bụ ihe nchekwa na-ekwesịghị ekwesị;Enwere ike idozi nke mbụ site na ultrafiltration nke ọtụtụ tubes ultrafiltration n'otu oge, na-ebelata ntinye uche, na nke ikpeazụ site n'ịgbanwe ihe ngwọta dị iche iche na-echekwa ruo mgbe enweghị mmiri ozuzo nke protein.
(4) Mgbe etinye uche na 1ml fọdụrụnụ, were 50ul nke ngwọta nchekwa, gbakwunye 10ul nke na-asọba wee hụ ma ọ dị na agba anụnụ anụnụ, dị ka ikpe ma tube ultrafiltration na-efu protein.Ọ bụrụ na tube ahụ na-agbapụta, wụsa oyi akwa dị elu wee banye n'ime tube ọhụrụ ka ịmalite ultrafiltration.Iji chọpụta kpọmkwem ma ọ bụrụ na-atụfu tubes, centrifuge maka 10min na 5mgml nke BSA tupu eruba, na-agba ọsọ na protein gluu, ma ọ bụ Bradford crude assay, ma gaa n'ihu na-agbakwụnye ihe ngwọta protein fọdụrụnụ (nke na-arụ ọrụ na ice ma na-egbochi protein site na kpo oku) ruo mgbe. agbakwunyere itinye uche niile.Lezienụ anya n'oge centrifugation ma ọ bụrụ na mmiri ozuzo nke protein na-eme, na-eduga na mmechi tube.Ọ bụrụ na mmiri ozuzo emee, chọpụta ma kpọmkwem ihe kpatara mmiri ozuzo bụ oke protein protein ma ọ bụ ihe nchekwa na-ekwesịghị ekwesị;Enwere ike idozi nke mbụ site na ultrafiltration nke ọtụtụ tubes ultrafiltration n'otu oge, na-ebelata ntinye uche, na nke ikpeazụ site n'ịgbanwe ihe ngwọta dị iche iche na-echekwa ruo mgbe enweghị mmiri ozuzo nke protein.
(5) A na-eji usoro ole na ole mbụ na-etinye uche na protein, ma ọ bụrụ na a ga-agbanwe ihe nchekwa ahụ, jiri nwayọọ tinye ihe nchekwa ọhụrụ (ultrafiltration site na 0.22um ultrafiltration membrane) na ihe dịka 1ml nke protein zuru ezu, ma tụgharịa uche na ihe dịka 1ml maka atọ. oge dị iche iche, yana olu ikpeazụ gbadoro ụkwụ na-adabere na ntinye protein a chọrọ, n'ozuzu ọ bụghị karịa 500ul, kamakwa n'ime 200ul.Mezuo 1000 × ma ọ bụ karịa n'oge atọ, n'ụzọ bụ isi mgbanwe mgbanwe, dị ka agbakọọ ma ọ dịkarịa ala 10 × ma ọ bụ karịa mmụba olu oge ọ bụla.
(5) A na-eji usoro ole na ole mbụ na-etinye uche na protein, ma ọ bụrụ na a ga-agbanwe ihe nchekwa ahụ, jiri nwayọọ tinye ihe nchekwa ọhụrụ (ultrafiltration site na 0.22um ultrafiltration membrane) na ihe dịka 1ml nke protein zuru ezu, ma tụgharịa uche na ihe dịka 1ml maka atọ. ugboro ugboro, na ikpeazụ lekwasịrị ikpeazụ olu dabere na chọrọ protein ịta, n'ozuzu ọ bụghị ihe karịrị 500ul, kamakwa n'ime 200ul.Mezuo 1000 × ma ọ bụ karịa n'oge atọ, n'ụzọ bụ isi mgbanwe mgbanwe, dị ka agbakọọ ma ọ dịkarịa ala 10 × ma ọ bụ karịa mmụba olu oge ọ bụla.
Oge nzipu: Nov-09-2022